Mehr als 960'000 Bücher und andere Druckschriften, mittelalterliche Handschriften und elektronische Datenbanken, Hörbücher, Zeitungen und Fachzeitschriften, Bild- und Tondokumente – insgesamt mehr als 1.1 Million Medien – das ist der derzeitige Bibliotheksbestand, der kontinuierlich weiter ergänzt wird.

Die Sammlung der ZHB umfasst Medien aus nahezu allen Wissensgebieten. Schwerpunktmässig gesammelt werden die in Luzern gelehrten Universitätsfächer: Theologie, Philosophie, Geschichte, Recht und Sozialwissenschaften. Des Weiteren: Psychologie, Pädagogik, Kunst, Sprach- und Literaturwissenschaften sowie Belletristik verschiedener Sprachen. Daneben zählt Sachliteratur - beispielsweise aus den Bereichen Naturwissenschaften, Medizin, Technik, Hauswirtschaft und Reisen - zum stark frequentierten Angebot der ZHB. Bilddokumente, wertvolle Handschriften und Musikalien werden in den Sondersammlungen der ZHB gesammelt, konserviert und erschlossen.

Der zur Verfügung stehende Erwerbungsetat von etwa CHF 800'000 p.a. (ca. 1.5 Mio für den Bereich Universität / Hochschule Luzern – Wirtschaft) erfordert eine strenge Selektion aus dem grossen Angebot jährlicher Neuerscheinungen. Vollständig gesammelt werden lediglich die Publikationen aus und über Stadt und Kanton Luzern. Die ZHB ergänzt ihre Sammlung auch durch Schenkungen. Besonderes Interesse besteht hierbei an Schenkungen, die die ausgewiesenen Sammelschwerpunkte des Hauses betreffen.

Zuständig für die Auswahl, Erwerbung und Erschliessung der Medien sind die FachreferentInnen, die die einzelnen Fachgebiete der Sammlung betreuen.